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| GENE0001-2 | Génie génétique
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| Durée : | 30h Th |
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| Crédits/ECTS : |
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| Titulaire(s) : | Jacques Dommes, Joseph Martial |
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| Langue : | Langue française |
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| Aperçu général : | 1. Introduction (J. Martial)
- Définitions
- Rappels de biologie moléculaire
2. Manipulation des fragments d'ADN (J. Martial)
- Isolement de fragments d'ADN
- Modification de fragments d'ADN
- Ligation de fragments d'ADN
- Identification et caractéristiques de fragments d'ADN
3. Génie génétique des Procaryotes (J. Martial)
- Vecteurs primaires pour le clonage dans Escherichia coli
- Vecteurs hybrides
- Rappels sur le fonctionnement des gènes procaryotes
- Vecteurs d'expression pour la production de protéines hétérologues chez E. coli
- Clonage et expression dans les bactéries Gram+
4. Construction et criblage de librairies d'ADN (J. Dommes)
- Nombre de clones dans une librairie
- Construction d'une librairie
- Identification (sélection par complémentation, marqueurs de sélection)
- Criblage d'une banque par hybridation
- Criblage par détection d'une protéine
5. Mutagenèse dirigée (J. Dommes)
- Mutagenèse aléatoire
- Mutagenèse dirigée via des oligonucléotides synthétiques
6. Applications particulières de la PCR (J. Dommes)
- Rappels
- Diagnostique
- Séquençage
- Modification de fragments d'ADN
- Analyse de mutations ponctuelles
- PCR inverse
- RT-PCR
- PCR quantitative
7. Génie génétique des levures et champignons filamenteux (J. Dommes)
- Techniques de transformation des levures
- Vecteurs utilisés chez Saccharomyces cerevisiae
- Vecteurs utilisés chez Kluyveromyces
- Levure méthylotrophes (Pichia, Hansenula)
- Sécrétion chez les levures
- Principaux problèmes d'expression de protéines recombinantes chez les levures
- Champignons filamenteux
8. Génie génétique végétal (J. Dommes)
- Transformation via Agrobacterium tumefasciens et le plasmide Ti
- Méthodes de transformation directes
- Vecteurs dérivés de phytovirus
- Techniques de génétique inverse
- Ingénierie métabolique
- « Protein pharming »
- Production de protéines recombinantes dans les algues vertes unicellulaires
9. Production de protéines recombinantes dans des cellules d'insectes (J. Dommes)
- Promoteurs
- Vecteurs
- Expression de protéines recombinantes dans les vers à soie
10. Clonage en cellules de Mammifère (J. Martial)
- Marqueurs de sélection
- Méthodes de transfection
- Vecteurs dérivés du virus SV40
- Vecteurs Vaccinia
- Vecteurs Alphavirus
- Thérapie génique
- Vecteurs Adenovirus
- Vecteurs Herpès
11. Animaux transgéniques (J. Martial)
- Techniques de transfection
- Utilité des animaux transgéniques
- « Dolly » : Multiplication d'un individu par transfert de noyau somatique dans un ovule énucléé |
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| Objectif du cours : |
- Acquisition de connaissances de base sur les techniques de transgenèse.
- Appréhension des potentialités du génie génétique dans l'étude du fonctionnement des organismes,
ainsi que dans l'amélioration des espèces utilisées par l'homme et pour la production de protéines recombinantes.
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| Pré-requis : | Biologie moléculaire et génétique (cours de bachelier en biologie). |
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| Organisation : | Cours organisés durant le premier quadrimestre. |
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| Notes de cours : | Présentations Powerpoint et notes de cours (partielles) mises à la disposition des étudiants via la plateforme WebCT pour la partie donnée par le Prof. J. Dommes.
Supports également disponibles pour la partie donnée par le Prof. J. Martial. |
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| Evaluation : | Examen écrit pour la première session, aussi bien que la seconde. |
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| Contacts : | - Prof. J. Martial (jmartial@ulg.ac.be)
- Prof. J. Dommes (j.dommes@ulg.ac.be) |
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